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《王(Wang)牌(Pai)对(Dui)王(Wang)牌(Pai)》|唐(Tang)嫣(Zuo) 202102

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液相色谱柱的清洗2021-11-22 17:20·色谱耗材反相色谱是迄今在高效液相色谱中应用最广泛的技术主要是因为它适用于分析极大多数的非极性物质和很多的可离子化的及离子化合物大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质因此分析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分离的含有疏水的机制也能以同样的保留方式分离固定相上还有少数物质如混合相(例如苯基-己基)、末端封闭和非末端封闭种类和极性嵌入相也存在于这些键合硅胶上还有很多填料用于反相色谱包括聚合物聚合物表面涂上硅胶和氧化铝无机-有机混合物涂层氧化锆和石墨化碳不同种类的固定相有他们自己的优点和缺点反相色谱柱利用各种流动相和添加物可以有很多的应用一些技术利用添加物可以改变或修饰填料的表面有时候这些添加物有可能会污染键合相表面硅胶表面因为有着疏水键合相而有一些别的化学性质残留的硅烷醇存在于所有的硅胶键合填料中这些硅烷醇具有弱酸性因此能与某些待分析物合基质成分特别是碱性成分因为硅烷醇的pKa值大约是4.5离子化能在中性pH条件下发生因此与阳离子产生静电相互作用就有可能发生较老的A型硅胶能容纳高浓度金属离子(有时候100ppm或更多)而这能使硅胶表面的酸性更大甚至能发生金属鳌合现象或清除一些化合物残留硅烷醇在非末端封闭的硅胶合短链键合相如C2或C4上更让人烦恼使用者必须清楚他们所用的固定相表面特殊性质和可能的分析物-固定相表面的相互作用这样当他们使用反相方法时才能考虑到可能的基质相互作用例如非常疏水的样品基质如玉米油高芳香物质和蜡能粘住固定相装填表面并且改变他们的性质含有蛋白质物质的生物流体也能吸附在装填表面尽管分析者想尽最大努力来保护HPLC柱子某些分析物-基质污染能使固定相受到有害的影响当柱子被污染它的色谱行为和没被污染的柱子会有些不同被污染的柱子能产生反压问题被污染的反相柱子必须清洗和再生才能恢复原来的操作条件这部分的柱子观察将讨论可行的方法使柱子回复原来的或差不多原来的状态因为键合硅胶柱子是最受欢迎的我重点讲述这种柱子最后我将讨论别的反相柱子的清洁步骤什么导致反相柱子污染产生通常样品中含有一些对分析者来说不感兴趣的东西盐、脂质、含脂物质、腐质酸、疏水蛋白质和其它一些生物物质是一些可能在使用时与HPLC柱发生相互作用的物质这些物质有比分析者的目标物或少或大的保留值那些保留值较小的物质如盐类一般来说在空体积时就被冲出色谱柱这些非目标产物的干扰能被检测器检测到而且能形成色谱峰气泡基线上移或者是负峰如果样品成分在柱子中有很强的保留而且流动相溶液成分不足以把这些物质洗脱下来多次上样后这些吸附在柱子表面的物质通常就会积累在柱头这些行为通常只有通过平行实验才能发现有着中等保留值的样品能被缓慢洗出而且表现为宽峰基线扰动或者基线漂移有时候这些被吸附的样品成分累积到一定程度足以使他们开始形成新的固定相分析物能与这些杂质作用形成一定的分离机理保留时间会波动拖尾会出现如果足够的污染产生柱子的反压能超过泵所能承受的最大压力使柱子无法工作以及在堵塞处产生空体积再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的利用简单的步骤来除去这些污染物往往能恢复其色谱行为有时候经过多次操作以后的色谱柱用90~100%的溶剂B(双溶剂反相系统中较强的溶剂)冲洗20个体积可以清除污染物例如柱子中残留的脂质就能用非水溶剂如甲醇、乙晴、四氢呋喃如果你使用的是缓冲液系统不要直接切换到强溶剂突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲液沉淀这样会导致更大的问题如柱头堵塞、管道堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵应该先用无缓冲流动相(即把缓冲液换成水)冲洗5~10个体积以后才更换强溶剂

发布于:襄汾县
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