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默克生命科学 | 6-磷酸葡萄糖脱氢酶（EC 1.1.1.49）的酶学测定2024-01-08 10:55·不能胖胖胖1.目标建立葡萄糖-6-磷酸脱氢酶酶促测定的标准化操作流程。如果感兴趣可以到默克www.sigmaaldrich.cn看具体内容2.适用范围本操作流程适用于大多数酶促测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性参数的产物。该测定不可用于测定来自肠膜明串珠菌的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。3.定义3.1.纯水 – 来自去离子系统的水，在25 ?C的电阻率大于或等于18MΩ?cm3.2.单位定义 - 在pH 7.4、25 °C并存在β-NADP的情况下，一单位每分钟可将1.0 μmole D-葡萄糖-6-磷酸氧化成6-磷酸-D-葡萄糖酸盐。3.3.G-6-PDH - 6-磷酸葡萄糖脱氢酶3.4. β-NAD = β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，氧化形式3.5. β-NADPH - β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，还原形式4.讨论5.责任分析服务人员应遵循本书面实验方案。6.安全有关危险因素及合适的操作注意事项，参阅安全数据说明书（SDS）。7.操作流程7.1.条件T = 25 °C，pH = 7.4，A340 nm，光路 = 1 cm7.2.方法分光光度法速率测定7.3.试剂：7.3.1. 250 mM双甘氨肽（缓冲液）利用纯水和双甘氨肽游离碱（货号G1002）配制33 mg/mL的溶液。在25 °C下用1 M NaOH或1 M HCl将pH调节至7.4。7.3.2. 60 mM D-葡萄糖6-磷酸溶液（G-6-P）利用纯水和D-葡萄糖6-磷酸单钠盐（Sigma-Aldrich货号G7879）在配制17 mg/mL的溶液。7.3.3. 20mM β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐溶液（β-NADP）利用纯水和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠盐（货号N0505）在配制15.4 mg/mL的溶液。7.3.4. 300 mM氯化镁溶液（MgCl2）利用纯水和1.0 M氯化镁溶液（货号M1028）配制0.3 mL/mL的溶液。7.3.5. 6-磷酸葡萄糖脱氢酶溶液（酶）临使用前，利用低温缓冲液（试剂7.3.1）配制0.3-0.6单位/mL的溶液。7.4.操作流程7.4.1. 将下列试剂(mL)加入适宜的容器，以制备反应混合物这意味着投保者的资金可以在保险公司的管理下实现较高的增值效果，从而更有效地筹备未来的退休生活。
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