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2024年12月18日，正脸来一张
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继续分享一一waters 2695高效液相色谱仪SOP2020-09-13 20:49·搞实验的小李1．目的：建立本公司化验室用Waters e2695高效液相使用与维护的标准操作程序，规范Waters高效液相的正确使用和校准，保证测量结果正确无误。2．范围：适用于本公司化验室Waters e2695高效液相的操作与维护。3．术语：4．职责：化验室QC人员负责本规程的执行；质保部长负责本规程执行情况的监督。5．操作程序与方法：5.1 仪器组成及电源：5.1.1 仪器组成：本仪器由泵、进样器、紫外检测器、柱温箱和Empower色谱工作站组成。5.1.2 电源：泵为220V稳压电源，检测器为220V稳压电源，工作站为220V稳压电源。5.2 外部硬件的操作：5.2.1依次打开电脑、液相分离单元和检测器电源，液相分离单元进行开机自检（注：打开顺序错误可导致软件与仪器连接不上）。同时检查流动相和10%甲醇的体积是否充足。5.2.2开机自检后，"分离单元"将进入Idle（空闲）模式。5.2.3冲洗密封垫，主屏幕下按【Diag】→"Diagnosities"界面，按Prime Seal Wash显示"Prime Seal Wash"屏幕，按【Start】，待排放口有水流出（气泡排净）时（约1分钟），按【Halt】停止，按【Close】关闭界面。（注：10%甲醇足够多）5.2.4冲洗进样针，按Prime Ndl Wash 显示"Prime Ndl Wash"屏幕，按【Start】，待自动停止。清洗两次，按【Close】关闭界面。（注：可配制与实验用流动相相同溶液）5.2.5湿法灌注：按【Exit】退出"Diagnosities"界面，按【Menu/Status】，进入"Status（1）"屏幕，在"Compomtion"中对所灌注的管路输入100%，按【Direct Function】，光标选"Wet Prime"，按【Enter】，显示"Wet Prime"后按【OK】，待结束后，依次重复操作对所用管路（A/B/C/D）进行灌注。5.2.6冲洗自动进样器，在"Status（1）"屏幕下，按【Direct Function】，光标选"Purge Injector",按【Enter】，显示"Purge Injector"界面，按【OK】。5.3点开Empower Pro软件图标,进入操作界面。5.3.1 单击鼠标左键进入"配置系统"。选中"项目"后，单击 "新建项目"。 出现"新建项目向导"，"表空间"中接受50MB的表空间缺省设置。在该向导步骤中，系统默认设置了"支持'全面审计追踪'"。如果不需要，可取消"支持'完全审计追踪'"复选框，以取消对项目元素（如方法和样品）所做的所有修改的记录。如需要，则选中该复选框之后，还再选择是否需要对"方法变化"、"结果变化"、"样品信息变化"和"删除"的更改进行注释。单击"下一步"。"选项"页中，选择用于本项目的选项。单击"下一步"。"访问控制"页中，根据需要选择设置对您所创建的项目具有访问权限的用户和用户组或者接受缺省的选项，然后单击"下一步"。 在"复制"中，接受默认的选项，然后单击"下一步"。在"输入名称"页中，输入项目的名称，必要时输入注释内容。最后单击"完成"来结束新项目的创建。 项目列表中出现新建的项目名称。5.3.2 分析方法的建立：单击命令栏上的View Method，如果出现"New Processing Parameters"页，选择 LC，然后单击 OK。单击命令栏上的 Instrument Parameters。 仪器参数出现在"View Method"工作区中，在此页面下，点击"Pump"设置：A泵流速、B泵流速、总流速以及柱温，柱压上限一般设在3500，下限一般设在70。再点击"UV Detector"设置：波长、单双波长。 从"File"菜单中选择 Save As。"Save current method"对话框将出现，在"Name"文本框中输入"方法名称"，在"Comments"文本框中输入有关该方法的注释（可选），然后单击Save。5.3.3 平衡系统：单击采集栏上的 (Equilibrate)。采集栏上"Status Information"部分将显示系统平衡的状态。从下拉列表中选择"自己方法名称"，然后单击 Equilibrate。为系统留出大约30分钟以上时间进行平衡，或直到基线稳定。5.4测定操作：5.4.1 单针进样，可以单击左下角的图标，出现以下"单针进样参数"对话框：在Method 下拉菜单中，可以选择指定的仪器参数，在所有参数设定完毕后，即可单击"Inject"键开始进样。同样可以通过图标终止进样。5.4.2 样品组进样，a．在"方法组"下拉菜单中选择欲使用的方法组，同时在下方的"仪器方法"下拉菜单中，选择欲使用的仪器方法。。b. 在sample set 表单中，逐行填写"Sample Name"、"Function"以及"Method"与"Run Time"、"Inj of Vail"" ＃ of Injs"后，即可点击图标。c. 一旦点击图标后，会出现如下"Run Sample Set"对话框：在对话框中写入样品组的名称，然后点击"Run"，即可运行样品组。d. 如果运行中需要终止样品组的运行，可点击图标，终止运行。5.5 数据的处理5.5.1 利用向导建立处理参数a．在Find Data中的选中要处理的样品，单击（Review，查看）图标，打开数据。b. 单击（处理方法向导，Processing Method Wizard），出现对话框。c. 选择"Start New Processing Parameters" （建立新的处理参数）。然后单击"OK"。d. 如果出现下面的对话框，选择"LC"，然后单击OK。e. 在"Integration－Integration Region"页面中，在空格中输入，或者在图上用鼠标左键拖拽来选择积分的起止时间，然后单击"Next"。f. 出现"Peak Width and Threshold"页面，接受默认的数值，不作改动，单击"Next"。g. 在"Peak Rejection"页中，根据需要设定最小面积和/或者最小峰高（也可不设），然后单击"Next"。h. 在"Calibration－General"页中，选择定量的方式：Area，校正曲线的拟合方式：Linear（线性）。然后单击"Next"。i. 在"Name" 栏中编辑组分名称（注意，此处的名称必须与在前面"Alter Sample"中所输入的名称一致）。然后单击"Next"。j. 在此页面中，不作任何改动，单击"Next"。k. 在此页面中，选择校正的类型（type of Calibration），如为外标法，选"External Standard Calibration"，单一内标法（即较为常用的内标法）选择"Single Internal Standard",并在下拉菜单中选择内标峰，然后单击"Next"。j. 出现"Method Name"页，输入方法名称，必要时输入注释（Comments）。单击"Finish"完成向导。k. 单击 (Save all)保存全部。5.5.2 定量计算a． 回到"Find Data"的Channel选项卡。用鼠标选择标样以及未知样品（注意一定要先选择标样，再选择未知样），然后单击右键出现快捷菜单，选择Process。出现如下窗口：在Peocess中，选"Use specified method"（使用指定的方法），并在下拉菜单中选择刚才利用向导建立的方法。单击"OK"。b．到"Results"（结果）选项卡中，单击"Updata"键更新结果。c. 选中欲浏览的结果，单击（Review，查看），出现查看主窗口，在色谱图下方的"Peak"表中，"Amount"栏中，即可看到定量的结果。d. 单击工作栏中的（Calibration Curve，校正曲线），打开校正曲线窗口。窗口的上部为曲线的方程等内容。可通过下拉菜单查看不同组分的相关信息。5.5.3数据的打印1. 在"Results"选项卡中选择欲打印的结果，单击（预览出版）。出现"打开报告方法"对话框。可以选择选择"Use a Report Method that was generated to appropriate for the selected data（使用对选中的数据适用的报告方法）"，或者在"Use the following Report Method(使用以下的报告方法)"下拉菜单中选择适当的报告方法(例如LC Calibration Report，LC校正曲线报告)，然后单击"OK"。2. 预览无误后，可单击，进行打印。5.6关机操作：5.6.1全部测定完毕后，按规定用适当溶剂冲洗泵、进样阀、色谱柱和检测器。5.6.2关闭检测器、泵及其他部件电源并拔下各插头，做好使用登记。5.7维护与保养：5.7.1试验所用的流动相应经过0.45?m的膜过滤,以降低色谱柱受污染的程度,延长使用寿命。5.7.2试验前先打开电源稳压器,待电压稳定后,方可打开仪器开关。5.7.3色谱柱最高工作压力一般不能超过3500。5.7.4检测器的光源具有一定的使用时间，所以每次在进样品前半小时左右打开，试验结束后，应先关闭检测器电源。5.7.5最后一次进样完成后，应用流动相冲洗一段时间，以保证洗脱完全，然后用纯水冲洗约半小时，以除去流动相中的无机盐类。5.7.6最后用甲醇对色谱柱进行再生保存。5.7.7操作者应细心了解仪器各部件性能。5.7.8每次操作完毕后，应及时清理所用物件，倒掉废瓶中的废液，用柔软的抹布擦拭仪器表面，保持仪器的清洁。5.7.9若仪器长时间不用，可定期加电，使仪器预热一段时间，以免仪器内部件受潮。5.7.10为保证检验数据的可靠，每年应由计量部门负责校验一次。5.8数据安全与备份管理5.8.1 实验员使用前，首先必须分别授权软件的使用账号和密码，并且确保防止泄露。不同实验员对应不同账号，不得共享。5.8.2 未经质保部经理允许，任何人不得私自修改仪器参数、方法参数。5.8.3 每3个月对各账号的实验数据进行一次备份，存档至其他受控的计算机中。韩江三角洲还有一点值得一提，以往说平原面积1200平方公里存在严重错误。我把潮汕三市的平原面积加一起得到4848.5平方公里，网上极少数严谨的网友算出潮汕平原面积约为0.47万平方公里是非常实的；何况梅州市的丰顺县还有一部分也属于潮汕平原。